聚胞苷酸生产方法
以5'-核苷酸为原料
5’-核苷二磷酸吡啶盐的制备 5'-核苷酸(5'-肌苷酸或5'-胞苷酸)[吗啡啉,双环己基碳二亚胺]→[乙醇,83℃]5'-核苷酸吗啡啉盐[三正丁胺磷酸盐,无水吡啶]→5'-核苷二磷酸吡啶盐(DIP吡啶盐或CDP吡啶盐)
固定化多核苷酸磷酸化酶的制备
酶的制备 大肠杆菌1.683菌体→破细胞提取→链毒素沉淀去核酸→硫酸胺盐析→DEAE一纤维素层析→收集0.35mol/L氯化钠洗脱液中酶活性最高的部分
固相载体的制备 琼脂粉熔化[甲苯、四氯化碳,斯盘-80]→搅拌冷却后与环氧氯丙烷交联制成珠状[对β-硫酸酯乙砜基苯胺]→[醚化]→[亚硝酸钠,盐酸]→固相载体
将分离纯化的酶溶液滴加入冰浴中的固相载体,即得共价结合的固定化多核苷酸磷酸化酶。
聚肌胞苷酸的制备
降底物IDP吡啶盐转成钠盐,CDP吡啶盐转成锂盐。
酶促反应,(每ml反应液所含μmol/L数)IDP或CDP15,Tris150,氯化镁6,EDTA1,聚合酶5U,pH 9.0,37℃,3-4h用盐酸调pH 1.5-2.0使多聚肌酸或多聚胞苷酸沉淀,离心,然后在磷酸缓冲液中溶解,等摩尔多聚肌酸和多聚胞苷酸混合,即得聚肌胞苷酸。本品以上资料由西亚试剂化学品数据库

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