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一、化学结构与纯度

1. 化学结构：考马斯亮蓝G-250的分子式为C47H48N3NaO7S2，分子量为926.1。

2. 纯度：高纯度的考马斯亮蓝G-250是确保实验结果准确性的关键。商业产品通常以高纯度形式出售，以满足科研和工业应用的需求。

二、光谱特性

1. 最大吸收波长：在游离状态下，考马斯亮蓝G-250的最大光吸收波长为465nm；当它与蛋白质结合后，最大光吸收波长变为595nm。这一特性是其用于蛋白质定量测定的基础。

2. 吸光度与蛋白质浓度的关系：在一定范围内，考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后的吸光度与蛋白质浓度成正比，因此可以通过测定吸光度来推算蛋白质浓度。

三、稳定性与保存条件

1. 稳定性：考马斯亮蓝G-250的稳定性受多种因素影响，如温度、光照、pH值等。在适当的保存条件下，其稳定性可以满足长期使用的需求。

2. 保存条件：通常建议将考马斯亮蓝G-250溶液储存在棕色瓶中，并置于4°C冰箱中避光保存，以防止光照和高温对其稳定性造成不利影响。

四、灵敏度与检测范围

1. 灵敏度：考马斯亮蓝G-250法的灵敏度较高，可以检测到微克级的蛋白质含量。这是因为其与蛋白质结合后产生的吸光度变化较大，易于准确测量。

2. 检测范围：该方法适用于一定范围内的蛋白质浓度测定。对于超出该范围的样品，可能需要进行稀释或采用其他方法进行测定。

五、干扰因素与排除方法

1. 干扰因素：某些物质如去污剂、TritonX-100、甘油、蔗糖、硫酸铵等可能会影响考马斯亮蓝G-250与蛋白质的结合反应，从而干扰测定结果。

2. 排除方法：在进行测定时，应尽量避免这些干扰因素的存在。如果无法避免，则应采用适当的方法进行校正或补偿。

六、安全注意事项

1. 安全性：虽然考马斯亮蓝G-250本身通常被认为是安全的，但在操作过程中仍需注意个人防护和实验室安全规范。如佩戴手套、护目镜等防护装备，避免皮肤直接接触染料溶液。

2. 废弃物处理：使用过的考马斯亮蓝G-250溶液应按照实验室废弃物处理规定进行妥善处置，避免对环境造成污染。

一、基本信息

- 中文名：考马斯亮蓝G250

- 英文名：Coomassie Brilliant Blue G250

- 别名：C.I. 42655，Acid Blue 90

- CAS号：6104-58-1

- EINECS号：228-058-4

- 分子式：C47H48N3NaO7S2

- 分子量：854.02

二、物理性质

- 外观：深褐色粉末，固体颜色为暗蓝色至棕色。

- 溶解性：溶于水（50 mg/ml）和乙醇（40 mg/ml），微溶于冷水，易溶于热水。在酸性溶液中呈红棕色，与蛋白质结合后呈蓝色。

- 稳定性：在室温下稳定，但长时间暴露于空气中可能变色。

三、化学性质

- 最大光吸收波长：游离状态下的最大光吸收波长为465 nm，当它与蛋白质结合后，最大光吸收波长变为595 nm。

- 反应性：考马斯亮蓝G250能与蛋白质中的特定基团（如氨基和羧基）发生非共价键结合，形成稳定的复合物。这种结合是可逆的，且在一定条件下可以解离。

- pH敏感性：在不同pH值下，其颜色和吸收光谱会发生变化。例如，在酸性溶液中呈红棕色，而在碱性溶液中则呈蓝色。

四、用途及原理

- 蛋白质定量：考马斯亮蓝G250是测定蛋白质浓度的经典方法之一。其原理是利用考马斯亮蓝G250与蛋白质结合后颜色的变化，通过比色法测定蛋白质含量。具体来说，考马斯亮蓝G250在游离状态下呈红色，当它与蛋白质结合后，颜色变为蓝色，且吸收光谱也发生变化。

- 其他应用：除了蛋白质定量外，考马斯亮蓝G250还可用于电泳条带染色等生物化学实验。

五、注意事项

- 考马斯亮蓝G250具有刺激性，应避免与皮肤和眼睛直接接触。

- 配制和使用染液时，应注意防护措施，避免吸入粉尘或烟雾。

- 考马斯亮蓝G250溶液应现配现用，长时间存放可能导致灵敏度降低甚至失效。

六、存储条件

- 考马斯亮蓝G250应储存在干燥、通风良好的地方，远离火源和高温区域。

- 储存温度通常为2-8°C，以确保其稳定性和有效性。