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核酸外切酶1

化合物T9200;EXO-1,囊泡转运抑制剂 461681-88-9 C15H12FNO3 273.26 文档:
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化学性质

质量标准

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1. 高度选择性

- Exonuclease I特异性地作用于变性或单链脱氧核糖核酸(DNA),从3' 羟基端开始逐步水解磷酸二酯键,释放出脱氧核糖核苷5' -单磷酸盐。

- 该酶对双链DNA或RNA无活性,这意味着它在生物体内可以精确地识别并作用于目标单链DNA分子。

2. 作用机制

- Exonuclease I通过催化磷酸二酯键的水解反应,将单链DNA分解成较小的片段或单体核苷酸。

- 这种水解过程是持续性的,直到遇到特定的结构或序列才会停止,如末端二核苷酸通常会保持完整不被降解。

3. 热稳定性

- Exonuclease I具有较高的热稳定性,可以在80°C的温度下处理15分钟而不失活。这使得它在PCR等高温反应中特别有用,因为PCR产物中过多的引物和任何其他的无关单链DNA会干扰后续的酶促反应。

4. 纯度与兼容性

- 高纯度的Exonuclease I已经过严格检测,确保无核酸内切酶、双链核酸外切酶和核糖核酸酶的污染。

- 它兼容多种缓冲液,包括储存缓冲液和甘氨酸缓冲液,这使其在实验中更加灵活和方便。

5. 应用

- Exonuclease I常用于去除PCR反应中的单链引物、巢式PCR中的单链引物以及从核酸混合物中去除含有3'羟基末端的单链DNA。

- 它也可用于测量与目标核酸内切酶反应的共价闭合环状单链DNA的内切核苷酸切割,以及利用外切酶I来测定DNA解旋酶活性。

6. 结构与功能

- Exonuclease I是一种多功能的5'→3'核酸外切酶和DNA结构特异性DNA核酸内切酶,在DNA复制、DNA错配修复(MMR)和DNA双链断裂修复(DSBR)中发挥作用。

- 在人类细胞中,它还被认为在端粒维持中起作用,并且其基因突变与对某些癌症的敏感性增加

一、纯度

* 定义:指核酸外切酶1样品中目标蛋白的含量,通常以百分比表示。高纯度意味着样品中杂质较少,有利于提高实验的准确性和重复性。

* 检测方法:通过SDS-PAGE电泳或Western Blot等蛋白质分析技术进行检测。

二、活性

* 定义:指核酸外切酶1催化底物反应的能力,通常以单位时间内催化底物转化的量来表示。高活性意味着酶促反应速度快,效率高。

* 检测方法:可以通过测定酶促反应的产物生成量或底物消耗量来评估酶活性。

三、特异性

* 定义:指核酸外切酶1对特定底物的识别和催化能力。高特异性意味着酶能够准确识别并作用于目标底物,减少非特异性反应。

* 检测方法:通过比较酶对不同底物的催化效率或产物生成情况来评估其特异性。

四、稳定性

* 定义:指核酸外切酶1在不同环境条件下(如温度、pH值、离子强度等)保持活性和结构稳定的能力。高稳定性意味着酶在实验过程中更不易失活或变性。

* 检测方法:可以通过在不同条件下储存或处理酶样品后,测定其活性变化来评估稳定性。

五、无污染

* 定义:指核酸外切酶1样品中不含有其他微生物、病毒或化学物质等污染物。无污染是保证实验结果准确性和安全性的重要前提。

* 检测方法:通过微生物培养、PCR检测或化学分析等方法来确认样品是否无污染。

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